細(xì)胞培養(yǎng)的成功與否直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。微生物污染是影響細(xì)胞培養(yǎng)健康的重要因素之一。因此，在實(shí)驗(yàn)室工作和細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，高效預(yù)防或清除微生物污染十分重要。本期內(nèi)容，一起來(lái)討論細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室中，預(yù)防、清除微生物污染的好方法。

一、如何預(yù)防細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的微生物污染

1、用科學(xué)有效的方法清潔實(shí)驗(yàn)環(huán)境

我們匯總了各大實(shí)驗(yàn)室的工作流程，希望可以給各位科研工作者提供參考：

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境定期清潔：定期使用 Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑（或濕巾），對(duì)工作區(qū)域消殺（建議半個(gè)月一次，但需根據(jù)細(xì)胞間實(shí)際使用頻率決定）。

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前的滅菌工作：每次實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，和實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用紫外線對(duì)細(xì)胞間進(jìn)行照射消毒，實(shí)驗(yàn)操作前用酒精或Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑對(duì)操作人員的手套進(jìn)行噴涂消毒。

實(shí)驗(yàn)儀器的定期清潔：在水浴鍋或培養(yǎng)箱水槽的水中，加入 0.5% 的 Water Shield™水槽支原體預(yù)防祛除試劑，可確保一個(gè)月內(nèi)水源不會(huì)變成支原體、真菌或細(xì)菌的污染源。液氮罐也應(yīng)定期用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑（或濕巾）進(jìn)底消殺，并更換潔凈的液氮，（液氮罐中凍存的細(xì)胞發(fā)生支原體污染，也會(huì)在液氮中引起污染的傳播）。

2、選擇合格的實(shí)驗(yàn)試劑

生物學(xué)實(shí)驗(yàn)很大程度上依賴各類生物學(xué)試劑的支持，其中，胎牛血清作為一種十分常見(jiàn)的生物學(xué)試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮著重要作用，可以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和健康。選擇高品質(zhì)的胎牛血清，能夠盡可能降低細(xì)胞污染的風(fēng)險(xiǎn)。以實(shí)驗(yàn)室常用的Ausbian進(jìn)口胎牛血清為例，通過(guò)經(jīng)7次加壓過(guò)濾，最后3次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理，通過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)，所有微生物檢測(cè)均為“未檢出"，有許多實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)期使用，為眾多科研用戶發(fā)布高水平文章提供支持。

3、嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前：在正式進(jìn)入細(xì)胞間前，需要在緩沖隔離間佩戴好細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室專用的防護(hù)用具：口罩、防護(hù)服、鞋套等，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，佩戴好手套。

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行中：嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，注意不要交叉污染試劑，另外實(shí)驗(yàn)安全、實(shí)驗(yàn)垃圾的處理也要格外注意。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后：用Mycoplasma-off™支原體祛除噴霧劑是所使用過(guò)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、物品表面進(jìn)行清潔。

二、如何祛除細(xì)胞中的微生物污染

當(dāng)細(xì)胞被細(xì)菌、真菌或是支原體污染后，都不建議繼續(xù)培養(yǎng)，盡量能夠直接銷毀，并對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行全面地清潔消毒。多數(shù)情況下，被真菌或細(xì)菌污染的細(xì)胞，“發(fā)病"迅速，還沒(méi)來(lái)得及拯救，細(xì)胞就會(huì)集體“陣亡"。因此，如果細(xì)胞十分珍貴，不能隨意丟棄，也建議僅對(duì)支原體污染的細(xì)胞進(jìn)行拯救。

祛除細(xì)胞中支原體的有效方法：

1、對(duì)于非常珍貴的細(xì)胞株（不可再得的）國(guó)際上使用 Mynox® Gold珍貴細(xì)胞株支原體清除試劑，做 4 周左右的支原體祛除持續(xù)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

2、對(duì)于非常珍貴的細(xì)胞株或生物樣品（無(wú)法長(zhǎng)期培養(yǎng)的），可使用 Mynox®珍貴生物樣品支原體清除試劑，對(duì)細(xì)胞做 3 小時(shí)左右的祛除支原體處理，處理完畢，沖洗細(xì)胞，將樣品放入潔凈的培養(yǎng)液中，重新培養(yǎng)或保存即可。

3、對(duì)于已經(jīng)進(jìn)行到中途的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如果將培養(yǎng)的大量細(xì)胞丟棄，會(huì)造成高昂的實(shí)驗(yàn)成本損失。對(duì)于這樣的情況，補(bǔ)救辦法如下：在培養(yǎng)液中加入 10% 的 Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑（一種新型復(fù)合抗生素）。按照廠家建議“懸浮沖洗"方法，配合處理細(xì)胞，培養(yǎng) 4 代以上，基本可祛除支原體污染。

懸浮沖洗法：

細(xì)胞消化后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管進(jìn)行離心，棄上清，加入PBS沖洗細(xì)胞后再次速離心棄上清，重復(fù)PBS沖洗過(guò)程3次后，用新鮮的含Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑的細(xì)胞培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)傳代

①Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑常規(guī)為-18℃保存，建議使用前，先融化分裝，仍舊-18℃避光保存，使用時(shí)按需融化配制。避免反復(fù)凍融。

②Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑按1:100濃度可直接加入培養(yǎng)基。例如：500ml培養(yǎng)基中添加5ml Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑，50mL/瓶的Zell Shield®細(xì)胞支原體祛除試劑可供5L培養(yǎng)基使用。

4、一些做原代培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室，為了預(yù)防取原代細(xì)胞過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生支原體污染，實(shí)驗(yàn)人員也可以在培養(yǎng)液中加入 10% 的 Zell Shield®（一種新型復(fù)合抗生素），培養(yǎng) 4 代以上，即可撤掉 Zell Shield®，此過(guò)程可有效預(yù)防支原體污染的發(fā)生。